Генмен және клондаумен қандай векторлармен істеу керек
Молекулалық клондау кезінде вектор ДНҚ молекуласы болып табылады, ол сыртқы геннің (-тарды) басқа ұяшыққа ауыстыру немесе енгізу үшін тасымалдаушы ретінде қызмет етеді, мұнда ол қайталануы және / немесе көрінуі мүмкін. Векторлар гендік клондаудың маңызды құралдарының бірі болып табылады және егер олар биожинақтағыш молекуласын кодтайтын қандай да бір маркерлік генді кодтайтын болса, онда оларды қабылдаушы организмде олардың енгізілуін және білдіруін қамтамасыз ету үшін биологиялық бағалау кезінде өлшеуге болады.
Атап айтқанда, клондау векторы - вирус, плазмидтен немесе клеткалардан (жоғары организмдерден) алынған ДНҚ, клондау мақсаттары үшін шетелдік ДНҚ фрагменті арқылы енгізіледі. Клондау векторы ағзаға тұрақты түрде қолдау көрсете алатындықтан, вектордың құрамында ДНҚ-ны ыңғайлы енгізу немесе жоюға мүмкіндік беретін функциялар бар. Клондау векторына клондалғаннан кейін, ДНҚ-ның фрагменті одан әрі нақтылықпен қолданыла алатын басқа векторға қосымша клонировать болады.
Кейбір жағдайларда вирустар бактерияларды жұқтыру үшін қолданылады. Бұл вирустар бактериофагтар немесе фаге деп аталады. Ретровирус - жануарлардың жасушаларына гендерді енгізудің тамаша векторы. ДНҚ дөңгелек элементтері болып табылатын плазмидтер - сыртқы бактерия жасушаларына сыртқы ДНҚ енгізу үшін қолданылатын ең көп қолданылатын векторлар. Олар көбінесе антибиотиктерге қарсы пневматикалық пластиналарда плазмидті ДНҚ білдіру үшін қолдануға болатын антибиотикке қарсы гендерді қолданады.
Өсімдік жасушаларына гендік трансферт көбінесе вектор ретінде жұмыс істейтін және қабылдаушы жасушаға үлкен плазмидті енгізетін топтық бактерия Agrobacterium tumefaciens арқылы орындалады. Антибиотиктер болған кезде клондау векторын қамтитын ғана жасушалар өседі.
Клондау векторларының негізгі түрлері
Векторлардың алты негізгі түрі:
- Плазмид. Бактериялы жасушада автономды түрде қайталанатын шеңберлі экстрохромозомдық ДНҚ. Плазмидтерде әдетте ұяшыққа 500-700 көшірме саны бар pUC19 сияқты жоғары көшірме нөмірі бар.
- Phage. Сызықты ДНҚ молекулалары бактериофагтың ламбадан алынған. Өмірлік циклін бұзбайтын шетелдік ДНҚ-мен ауыстыруға болады.
- Космиддер. Плазмидалардың және фагтардың ерекшеліктерін біріктіретін тағы бір дөңгелек шеткі хромосомалық ДНҚ молекуласы.
- Бактериялық жасанды хромосомалар. Бактериялық мини-Ф плазмидтеріне негізделген.
- Ашытқы жасанды хромосомдары. Бұл жасанды хромосома, ол репликацияның, ашытқы центромерінің (хроматидті немесе дядьді байланыстыратын хромосоманың бөлігі) теломерлерді (ұяшықтың бөліну кезеңінде кесіп тастаған хромосомалардың ұштарындағы бір реттік буферлік) және таңдаулы маркерді ашытқы жасушаларында сәйкестендіру үшін.
Адамның жасанды хромосомасы. Бұл вектордың түрі адамның жасушаларына геннің жеткізілуі үшін ықтимал пайдалы және экспрессиялау және хромосома функциясын анықтау құралы. Ол өте үлкен ДНҚ фрагменті болуы мүмкін.
Барлық жобаланған векторлар репликацияның шығу тегі (репликатор), клондау алаңы (шетелдік ДНҚ кірістіруі маңызды маркерлердің репликациясын немесе инактивациясын бұзбайтын жерде) және таңдаулы маркер (әдетте антибиотикке қарсы тұруды қамтамасыз ететін ген).