Бұл эндонуклеада қалай ерекшеленеді?
Ферменттерді шектеу туралы қаншалықты білесіз? Осы шолу арқылы олардың не істеп жатқанын және неге маңызды екенін түсіну.
Шектеу энзимдерін анықтау
Эндонуклеаздарды шектеу - бұл ДНҚ молекулаларын қысқартатын фермент класы. Әрбір фермент ДНҚ тізбегіндегі нуклеотидтердің бірегей тізбегін таниды. Мұндай тізбектер, әдетте, 4-6 базалық жұп болып табылады. Кездейсоқтар Палиндромикалық болып табылады, бұл қосымша ДНҚ тізбегі кері ретпен бірдей реттілікте болады.
Басқаша айтқанда, ДНҚ-ның екеуі бірдей жерде кесіледі.
Бұл ферменттер табылған жерде
Ферменттерді шектеу бактериялардың көптеген штамдарында кездеседі, онда олардың биологиялық рөлі жасуша қорғанысына қатысу болып табылады. Бұл ферменттер ұяшыққа еніп, оны бұзып, шетелге (мысалы, вирустық) ДНҚ-ты «шектейді». Қабылдағыш ұяшық өзінің шектеулі ферменттеріне тән учаскелерде өзінің ДНҚ-ны метилирлейтін шектеу-модификация жүйесімен жабдықталған, осылайша оны бөлінуден қорғайды. 100-ден астам түрлі нуклеотидті тізбекті танитын 800-ден астам белгілі ферменттер анықталды.
Биотехнологияда қолдану
Ферменттердің шектеуі биотехнологияда ДНҚ-ны жекелеген адамдар арасында фрагменттің ұзындығының айырмашылықтарын зерттеу үшін (Ұзындығы полиморфизмді шектеу - RFLP) зерттеу үшін кішірек жіптерге бөлінеді. Олар сондай-ақ ген клондау үшін қолданылады.
RFLP әдістерінің көмегімен адамдар мен топтардың жеке геномның белгілі бір бөліктеріндегі гендік тізбектегі айырмашылықтар мен бөліну үлгілерін айырмашылығы бар екенін анықтау үшін пайдаланылды.
Бұл бірегей аймақтарды білу - ДНҚ саусақ іздері үшін негіз болып табылады. Осы әдістердің әрқайсысы ДНҚ бөліктерінің бөлінуі үшін агарозды гель электрофорезіне байланысты. Tris негізінен, Boric қышқылынан және EDTAден тұратын TBE буфері әдетте ДНК өнімдерін зерттеу үшін агарозды гель электрофорезі үшін қолданылады.
Ферменттерді шектеу түрлері
Ферменттерді шектеудің үш түрі бар. I типті ДНК-ды кездейсоқ орындарда тану алаңынан 1000 немесе одан да көп базалық жұптарға дейін қысқартады. ІІІ типті сайттан шамамен 25 базалық жұпта кеседі. I және III типтері АТФ-ды талап етеді және бірнеше бөлімшелері бар ірі ферменттер болуы мүмкін. Негізінен биотехнологияда қолданылатын II типті энзимдер АТФ-ға қажеттілік жоқ, танылған ретпен ДНҚ-ны қысқартады және аз және қарапайым.
ІІ типті шектеу ферменттері оқшауланған бактериялық түрлерге сәйкес аталады. Мысалы, EcoRI энзимі E. coli- ден оқшауланған. Көпшілік қоғамдық тамақтада E. coli ауруларымен таныс.
II түріндегі шектеу ферменттері екі тізбекті тану дәйектілігінің ортасында немесе әрбір тізбекті тану дәйектілігінің бір соңына жақындатып тастағанына қарай екі түрлі кескін түрін жасай алады.
Бұрынғы кесектер ешқандай нуклеотидті ілінбейтін «өткір ұштар» жасайды. Соңғысы «жабысқақ» немесе «үйлесімді» аяқтайды, себебі ДНҚ-ның әрқайсысы пайда болған басқа фрагменттері басқа бөліктерді толтырады. Екі рекомбинантты ДНҚ және протеин жасау үшін молекулалық генетикада пайдалы.
ДНҚ-ның бұл түрі бұрынғысынша бір-бірімен байланысы жоқ екі немесе одан да көп әр түрлі жіптерді біріктіру арқылы жасалады.