Бұл буфер ДНҚ-ның электрофорезді бөлінуі үшін қолданылады
TBE буфері кішірек ДНҚ бөліктерін (MW <1000) бөліп алу үшін пайдалы, мысалы, шектеу ферменттерінің дайындамаларының кішкене өнімдері.
TBE буферизациялық әлеуетке ие және TAE буферіне қарағанда айтарлықтай рұқсат береді. TAE буфері - бұл трис негізін, сірке қышқылынан және EDTA (Tris-acetate-EDTA) негізіндегі ерітінді.
TBE әдетте TAE-ге қарағанда қымбатырақ және ДНК-ны тазарту және лигатура сатысы қарастырылған жағдайда проблемалар тудыруы мүмкін ДНК лигазын тежейді. Келесі үш қарапайым қадаммен TBE буферін қалай жасау керектігін үйреніңіз. Бұл буферді жасау үшін 30 минуттан артық уақыт кетпеу керек. Мұнда келесідей:
EDTA қорының шешімін дайындаңыз
EDTA (этилендиаминді тетрааксис қышқылы) ерітіндісі уақытынан бұрын дайындалуы керек. EDTA рН 8,0 дейін реттелмейінше ерітіндіге толығымен жете алмайды. 0,5 М EDTA 500-миллилитрлік ерітіндісі үшін 93,05 грамм ЭДТА декориум тұзын (FW = 372,2) салмақ. Содан кейін оны 400 миллилитр деионизацияланған суда ерітіп, рН-ны NaOH арқылы реттеңіз. Содан кейін түпкілікті көлемін 500 миллилитрге дейін толтырыңыз.
TBE қорының шешімін дайындаңыз
TBE концентрацияланған (5х) қор ерітіндісін 54 грамм Трис базасы (FW = 121,14) және 27,5 г бор қышқылы (FW = 61,83) салмаңыз және шамамен 900 миллилитр деионизацияланған суда ерітіңіз. Содан кейін 20 миллилитр 0,5 М EDTA (pH 8,0) қосып, ерітіндіні 1 литр соңғы көлеміне реттеңіз.
Бұл шешім бөлме температурасында сақталуы мүмкін, бірақ тұнба ескі ерітінділерде пайда болады. Буферді шыны бөтелкелерде сақтаңыз және тұнба пайда болған жағдайда тастамаңыз.
TBE жұмыс шешімін дайындаңыз
Агарозды гель электрофорезі үшін TBE буферін 0.5x концентрациясында (концентрат қоймасының 1:10 разбавления) пайдаланылуы мүмкін. Қойылтылған ерітіндіні 10 есе деионизацияланған сумен араластырыңыз. Ерітінділердің соңғы концентрациясы 45 мкм Трис-борат және 1 мМ EDTA. Буфер енді агароздық гельді қолдануға дайын.
Сізге не қажет
TBE буферін жасау үшін сізге тек төрт зат қажет. Бұл тізімдегі қалған заттар жабдық болып табылады. Талап етілетін төрт зат - ЭДТА декодтық тұзы, Трис негізі, бор қышқылы және деионизацияланған су.
Жабдықтарға келетін болсаңыз, қажет болғанда сізде рН көрсеткіші және калибрлеу стандарттары қажет болады. Сонымен қатар сізге 600-миллилитр және 1500-миллилитрлік стакандар немесе шұжықтар қажет. Жабдықтардың мұқтаждықтарын дөңгелектеу цилиндрлерді, араластырғыштарды және араластырғыштарды бітірді.
Сіз бастағанға дейін қажет нәрсенің бар екеніне көз жеткізу үшін сіз пайдаланатын зертханада түгендеуді тексеріңіз. Тиісті материалдардан шыққаныңыз үшін шешімді дайындаудың ортасында тоқтатудың қажеті жоқ.
Егер сіздің зертханаыңыз мектепте немесе жұмыс орныңызда болса, қордағы барлық элементтер бар екенін көру үшін тиісті қызметкерлермен тексеріңіз. Бұлай ету ақыр соңында уақыт пен энергияны үнемдеуі мүмкін.