Иммуногистохимиялық бояу буферін қалай жасауға болады
Фосфат буферлі тұзды (PBS) иммуногистохимиялық (IHC) бояу үшін әдетте қолданылатын буферлік ерітінді болып табылады және ол жиі биологиялық зерттеулерде қолданылады. PBS - натрий сутегі фосфаты, натрий хлориді және кейбір жағдайларда калий хлориді және калий дигидрогенфосфатын қамтитын су негізіндегі тұз ерітіндісі.
Иммуногистохимиялық бояу
Иммуногистохимия антигендерді антигендерді анықтайтын процесті білдіреді, мысалы, биологиялық тіндерде антигендерге байланысатын антиденелердің принципін қолдану арқылы тіндік бөліктің жасушаларында белоктар.
Иммунофлюоресцентті бояу алғашқы иммуногистохимиялық бояу әдісі болды.
Антигендер антиген-антиденелерді байланыстыру реакцияларына байланысты флуоресцентті бояғыштар қолданатын антиденелермен байланыста кезде көрінеді Бұл процесс флуоресцентті микроскоптың астындағы нақты толқын ұзындығының қызықты жарықпен белсендірілгенде пайда болады.
Ерітінділердің осмолярлық және иондық концентрациясы адам ағзасына сәйкес келеді - олар изотоникалық.
PBS үшін рецепт
Сіз бірнеше жолмен PBS дайындауыңызға болады. Бірнеше формулалар бар. Олардың кейбіреулері құрамында калий бар, ал басқалары кальций немесе магний бар .
Бұл рецепт салыстырмалы түрде оңай. 10X PBS ерітіндісі үшін (0,1 М). Дегенмен, сіз сондай-ақ 1X қор ерітіндісін жасауға немесе осы 10X рецептісімен бастап, оны 1X-ге дейін сұйылтуыңызға болады.
Барлық процесс шамамен 10 минутты алады.
Сондай-ақ, Tween қосудың мүмкіндігі ұсынылған.
Сізге PBS буферін жасау керек
- Натрий фосфатының монобаздық (сусыз)
- Натрий фосфаты дибасикалық (сусыз)
- Натрий хлориді
- Масштаб және қайықтарды салмақ
- Магнитті араластырғыш және араластырғыш
- РН көрсеткішін реттеу үшін калибрленген және тиісті шешімдер
- 1 л көлемді ыдыс
- Tween 20 (міндетті емес)
Фосфатты буферлік салынды қалай жасауға болады (PBS)
10,9 г сусыз натрий фосфаты дибасикалық (Na2HPO4), 3,2 г сусыз натрий фосфаты монобазды (NaH2PO4) және 90 г натрий хлоридін (NaCl) салмаңыз.
1 л тазартылған судың астына ерітіңіз.
РН 7,4-ге теңшеңіз және ерітіндіні 1 л көлеміндегі соңғы көлемге дейін жеткізіңіз.
Қолдану алдында 10X мөлшерін жібітіңіз және қажет болса рН параметрін қайта орнатыңыз.
Сіз 1L шешіміне 5мл Tween 20 қосып, 0,5% Tween 20 бар PBS шешімін жасай аласыз.
PBS буферін жасау бойынша кеңестер
PBS шешімін жасағаннан кейін бөлме температурасында буферді сақтаңыз.
Сусыз реагенттерді алмастыруға болады, бірақ қосымша су молекулаларын орналастыру үшін әрқайсысының тиісті массасын қайта есептеуге тура келеді.
Фосфатты буферленген тұзды пайдалану (PBS)
Фосфат буфференді тұздығының көп қолданысы бар, өйткені ол көптеген жасушаларға изотоникалық және токсикалық емес. Ол заттарды сұйылту үшін пайдаланылуы мүмкін және ол көбінесе жасушалардың контейнерлерін шайып алу үшін қолданылады. PBS биомолекулаларды құрғатуға арналған әр түрлі әдістерде разбавлять ретінде пайдаланылуы мүмкін, себебі оның ішіндегі су молекулалары зат-ақуызға айналады. Ол «кептіріледі» және қатты бетіне иммобилизацияланады.
РН жасушалардың жойылуын болдырмау үшін тұрақты және дәйекті болып қалады.
Затқа түсетін судың жұқа қабаты денатурацияға немесе басқа да конформациондық өзгерістерге жол бермейді. Карбонаттық буферлер бірдей мақсаттарда қолданылуы мүмкін, бірақ тиімділігі аз.
PBS ақ эллипсометриядағы ақуыз адсорбциясын өлшеу кезінде анықтамалық спектрді алу үшін пайдаланылуы мүмкін.