Бұл буфер ДНҚ қозғалысын зерттеу үшін қолданылған
Бұл буферде төменгі иондық күш пен буферлік қабілеті аз. Ол үлкен (> 20 кб) ДНҚ бөліктерінің электрофорезіне өте қолайлы және жиі алмастырылуы немесе ұзағырақ (> 4 сағ) гель уақытына қайта айналдыруы қажет.
Осыны ескере отырып, буфердің бірнеше пакетін қарастырғыңыз келуі мүмкін.
Буфердің оңай жасалуы және қадамдар жылдам орындалуы ескеріле отырып, бір уақытта бірден көп партияларды жасау уақытты қажет етпейтін немесе тартуға қиын болмауы керек. Төмендегі нұсқауларды қолданып, TAE буферін жасау үшін 30 минут қажет. Мұнда келесідей:
EDTA қорының шешімін дайындаңыз
EDTA (этилендиаминді тетрааксик қышқылы) ерітіндісі уақытынан бұрын дайындалады. EDTA шамамен 8,0 дейін реттелгенше, ерітіндіге толығымен жете алмайды. 0,5 М EDTA 500-миллилитрлік ерітіндісі үшін 93,05 грамм ЭДТА декориум тұзын (FW = 372,2) салмақ. 400 миллилитр деионизацияланған суда ериді және рН натрий гидроксидімен (NaOH) реттеңіз. Шешімді 500 миллилитр соңғы көлемге дейін толтырыңыз.
TAE қорының шешімі
242 грамм Трис базасын (FW = 121,14) таразылап, оны 750 миллилитр деионизацияланған суда ерітіп, TAE концентрацияланған (50x) қор ерітіндісін жасаңыз.
Мөлдір қышқылдың 57,1 миллилитрін және 0,5 М EDTA (pH 8,0) 100 миллилитрін мұқият қосыңыз. Осыдан кейін, шешімді соңғы литрге теңшеңіз. Бұл қор ерітіндісін бөлме температурасында сақтауға болады. Бұл буфердің рН мәні реттелмеген және шамамен 8,5 болуы керек.
TAE жұмыс шешімін дайындаңыз
1x TAE буферінің жұмыс шешімін ерітіндідегі ерітіндіні 50 есе деионизацияланған сумен еріту арқылы жасайды.
Ерітінділердің соңғы концентрациясы 40 мМ құрайды. Трис-ацетаты және 1 мл EDTA. Буфер енді агароздық гельді қолдануға дайын.
Буфер үшін не қажет
TAE буферін жасау тек жылдам және қарапайым нұсқаулар жиынтығын талап ететіндіктен, оған қажетті материалдардың саны артық емес. Сізге EDTA дезодиясының тұзы, Трис негізі және мұзды сірке қышқылы қажет.
Аралық жасау үшін, қажет болған жағдайда, рН көрсеткішін және калибрлеу стандарттарын талап етеді. Сізге сондай-ақ 600 миллилитр және 1500 миллилитрлік стакандар немесе баллондар, сондай-ақ цилиндрлерді бітіру керек. Ақыр соңында, сізге деионизацияланған су қажет, араластырғыштар және араластырғыштар керек.
Аяқтау
Сіз буферді қайда жоспарлап отырсыздар - мектеп сайтында, жұмыс орнында немесе басқа үйде, мысалы, үйде? TAE буферіне арналған барлық материалдардың бар екеніне көз жеткізбей тұрып, инвентаризацияны тексеріңіз.
Материалдар үшін ақы төлеудің қажеті болмаса, үйден тыс аралық жасауды ұсынамыз. Интернеттегі материалдарды оңай тапсырыс бере аласыз немесе олар үшін арнайы дүкенге баруыңызға болады.