1983 жылы жасалынған ПТР процесі ДНҚ-ны реттеуге және жеке гендердегі нуклеотидтердің тәртібін анықтауға мүмкіндік берді.
Әдіс жылу циклін немесе ДНҚ балқыту және репликация үшін реакцияны қайта қыздыру және салқындатуды қолданады. PCR жалғасқан сайын, «жаңа» ДНҚ репликалау үшін үлгі ретінде пайдаланылады және ДНҚ үлгісін күшейтетін экспоненталық тізбекті реакция туындайды.
ПТР әдісі биотехнологияның көптеген салаларында, оның ішінде протеин жасау , клондау, сот сараптамасы (ДНҚ саусақ ізі), әке болуды тексеру, тұқым қуалайтын және / немесе жұқпалы ауруларды диагностикалау және экологиялық үлгілерді талдау үшін қолданылады.
Сот сараптамаларында, атап айтқанда, ПТР әсіресе пайдалы, себебі ол тіпті ДНҚ дәлелдерінің ең аз мөлшерін күшейтеді. ПТР-ны мыңдаған жылдардан бері ДНҚ талдау үшін қолдануға болады және бұл әдістер бүкіл 800 мың жастағы мамонттан бүкіл әлемнің мумиясына дейін анықтау үшін қолданылған.
PCR процедурасы келесідей:
- Инициализациялау: Бұл қадам тек ыстық бастау PCR талап ететін ДНҚ полимеразы үшін қажет. Реакция 94-тен 96 ° C дейін қызады және 1-9 минутқа дейін сақталады.
- Денатурация: егер процедура инициализацияны қажет етпесе, денатурация - бұл бірінші қадам. Реакция 20-30 секунд бойы 94-98 ° C дейін қызады. ДНҚ үлгісіндегі сутегі байланыстары бұзылып, жалғыз тізбектелген ДНҚ молекулалары құрылады.
- Күйдіру: реакция температурасы 50-65 ° C дейін төмендейді және 20-40 секундқа дейін ұсталады. Праймерлер бірқалыпты ДНҚ үлгісіне жалтырады. Бұл қадамда температура өте маңызды. Егер ол тым ыстық болса, праймердің байланысы болмауы мүмкін. Егер ол тым суық болса, праймер мұқият емес болуы мүмкін. Жақсы байланыс бастапқы синтаксис үлгі үлгісіне сәйкес болғанда қалыптасады.
- Ұзарту / ұзарту: Бұл кезеңде температура полимераздың түріне байланысты өзгереді. ДНК полимеразы толық жаңа ДНҚ тізбегін синтездейді.
- Қорытынды ұзарту: Бұл қадам соңғы ПТР айналымынан кейін 5-15 минут ішінде 70-74 ° C температурада орындалады.
- Қорытынды ұстау: Бұл қадам міндетті емес. Температура 4-15 ° C температурада сақталады және реакцияны жоғарылатады.
Рәсім үш кезеңге бөлінеді:
- Экспоненциалды күшейту: Әр цикл кезінде өнім (қайталанатын ДНҚ-ның нақты бөлігі) екі еселенген.
- Тегістеу кезеңі: ДНҚ полимеразы қызметі жоғалтады және реагенттерді жұмсайды, реакция баяулайды.
- Плото: Жоқ өнім жинақталады.